*液相色谱法分类

        *液相色谱法是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法，自20世纪60年代崛起，经过数十年的发展，在理论和实践方面日趋完善，应用范围已涉及医药、环保、生命科学、石油化工等几乎所有基础与应用领域。在按机理可以分为以下几类：

1. 吸附色谱法( adso rption chromatography)

        以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。使用*多的吸附色谱固定相是硅胶, 流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。在吸附色谱中, 不同的组分因受固定相吸附力的不同而被分离。组分的很 性越大, 固定相的吸附力越强, 则保留时间越长。流动相的很 性越大, 洗脱力越强, 则组分的保留时间越短。

2. 液-液分配色谱法( liquid-liquid chromatography)

      液-液分配色谱的固定相(覆盖于填料表面的溶剂膜) 和流动相是互不相溶的两种溶剂, 分离时, 组分溶入两相中, 不同的组分因分配系数( K) 的不同而被分离。按照固定相和流动相很 性的不同, 分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。

（1）正相色谱法( normal phase chromatography)

        固定相很 性大于流动相很 性的分配色谱法称为正相色谱法。硅胶与氰基键合硅胶、氨基键合硅胶等很 性的化学键合固定相是该法常用的固定相, 流动相一般为很 性较小的有机溶剂。在正相色谱中, 很 性小的组分由于K 值较小先流出, 很 性较大的组分后流出。正相色谱法用于溶于有机溶剂的很 性及中等很 性的分子型物质的分离。

（2）反相色谱法( reversed phase chromatography)

        流动相很 性大于固定相很 性的分配色谱法称为反相色谱法。反相色谱法使用非很 性固定相，*常用的非很 性固定相是十八烷基硅烷键合硅胶，还有辛烷基硅烷键合硅胶等，氰基柱与氨基柱也可用于反相色谱。流动相常用水与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合溶剂。在该法中很 性大的组分因K值较小先流突出谱柱，很 性较小的组分后流出。流动相中有机溶剂的比例增加，很 性减小，洗脱力增强。反相色谱法是目前应用*广泛的*液相色谱法。

3. 离子交换色谱法( ion exchange chromatography ) 

        离子交换色谱法是以离子交换剂为固定相的色谱方法, 组分因和离子交换剂亲和力的不同而被分离。柱填料含有很 性可离子化的基团, 如羧酸、磺酸或季铵离子, 在合适的pH 值下, 这些基团将解离, 吸引相反电荷的物质。由于离子型物质能与柱填料发生不同程度的吸引- 解吸, 所以可被分离。

        样品中不同的组分因离子交换平衡常数的不同而分离。离子交换色谱的流动相一般为一定pH 值的缓冲溶液, 有时也
加入少量的有机溶剂, 如乙醇、四氢呋喃、乙腈等, 以增大组分在流动相中的溶解度。流动相的pH 值影响离子交换剂的交换容量。对弱酸或弱碱性的被分离组分, 流动相的pH 值还会影响其电离状况, 待分离组分需处于离解状态, 才能被分离。离子交换色谱法在药物分析中的应用非常广泛, 例如生物碱、磺胺类药物、某些抗生素及维生素等的分析均可采用此方法。

4. 分子排阻色谱法( size exclusion chromatography)

        分子排阻色谱也称为凝胶色谱。其固定相是具有一定孔径范围的多孔性物质, 即凝胶。被分离组分因分子空间尺寸大小的不同而被分离。当组分被流动相携带进入色谱柱时, 体积大的分子不能进入固定相表面的孔穴中, 而随流动相直接通过色谱柱, 保留时间*短。体积小的分子可以进入孔穴内, 在色谱柱中所走的途径较长, 保留时间也较长。分子的体积越小, 可进入的孔穴越多, 所走的路径越长, 保留时间也越长。因此,凝胶色谱中, 在一定范围内, 体积不同的分子保留时间不同,从而达到分离的目的。凝胶色谱法主要用来分离高分子化合物, 如蛋白质、多糖等。由于分子量和分子体积有关, 凝胶色谱还可以用来测定组分的分子量。

5. 亲和色谱法( high performance a ffinity chromatography,HPAC)

        亲和色谱法是利用或模拟生物分子之间的专一性作用, 从生物样品中分离和分析一些特殊物质的色谱方法。该法的固定相是将配基连接于适宜的载体上而制成的, 利用样品中各种物质与配基亲和力的不同而达到分离。当样品溶液通过色谱柱时, 待分离物质X与配基L形成X- L复合物, 而被结合在固定相上, 其他物质由于与配基无亲和力而直接流突出谱柱, 用适宜的流动相将结合的待分离物质洗脱, 如采用一定浓度的醋酸或氨溶液为流动相, 减小待分离物质与配基的亲和力, 使复合物离解, 从而洗脱下来。HPAC 可用于生物活性物质的分离、纯化和测定, 还可以用来研究生物体内分子间的相互作用及其机理等。

6. 手性色谱法( chira l chromatography )

        许多有机药物的分子结构中有不对称碳原子, 又称手性碳原子, 有手性碳原子的药物具有旋光性。立体构型不同的对映体, 其药效、毒副作用往往不相同。例如氯霉素( 含有二个手性碳原子), 只有D-(-)异构体有效, 而L-(+)异构体完全无效。因此, 对映体的分离, 在药物的制备和质量控制方面, 具有重要的意义。对映体在普通条件下的理化性质相同, 因此分离对映体需要在手性拆分条件下进行。分离对映体的色谱方法称为手性色谱法。